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本试剂盒可从同一样品中同时提取总RNA和基因组DNA。DNA和RNA提取前无需将样品分离。可从培养的真菌细胞、动物和植物组织中提取DNA和RNA。

本试剂盒提供了一套独特的缓冲液系统，无需苯酚/氯仿抽提，并提供吸附柱，可从总RNA中分离纯化基因组DNA。纯化的DNA可应用于限制性酶切、PCR和其他后续分子生物学实验。提取的RNA可用于mRNA分离、探针制备、RTPCR、Northern blot、引物延伸、RNA酶保护实验和体外翻译等。操作简单快速。基因组DNA和RNA的提取不超过40min。

• 可在40min内同时提取出基因组DNA和总RNA。
  
• 提取的基因组DNA质量高，分子量≥20kb。
  
• 提取的总RNA质量高，无基因组DNA污染。
  
• 得率高，重复性好。
  
• 无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。

• 从动物组织中可纯化出最高10μg的基因组DNA。纯化的基因组DNA平均长度为20～30kb。这个长度的DNA特别适用于PCR，同时完全变性的模板对于高扩增效率非常重要。纯化的DNA可直接用于任何后续实验，包括：
  
  • PCR和real-time PCR
    
  • Southern,dot和slot blot分析
    
  • 比较基因组杂交(CGH)
    
  • 基因型分型，SNP分析
• 从动物组织中可纯化出最高20μg的总RNA。纯化的RNA可直接用于任何后续实验，包括：
  
  • RT-PCR
    
  • 实时荧光定量PCR
    
  • 差异显示
    
  • cDNA合成
    
  • Northern,dot和slot blot分析
    
  • 引物延伸
    
  • Poly A + RNA筛选
    
  • RNase/S1核酸酶保护实验
    
  • 微阵列

• 离心速度至少达到12000×g的小型离心机
  
• RNase-Free的移液枪和枪头
  
• 涡旋混合器
  
• RNase-Free的乙醇(96～100%)
  
• RNase-Free离心管(1.5mL)

• 样品采集和保存
  

  使用新鲜样品可获得最佳结果。从新鲜样品中纯化总DNA/RNA时，样品采集后立即将将新鲜的细胞和组织样品放入液氮或置于冰上。迅速将样品裂解或匀浆。

  如果样品使用前要先保存，应立即放入于液氮冷冻或放入组织RNA室温保存液(货号：GS2319)，然后于-80℃长期保存。保存的样品应避免反复冻融，因为这样会导致DNA/RNA的降解。

• 样品匀浆

  我们推荐用液氮处理组织样品，并立即用Buffer Lysis-DR/Buffer Lysis-DRP裂解样品。但是，使用匀浆机也会取得较好结果。

  样品采集和匀浆使操作应迅速，拿样品和试剂时应戴一次性手套，避免RNase污染。

  使用研钵、杵和铲子处理和转移样品时应预冷。加入Buffer Lysis-DR/Buffer Lysis-DRP前不要让组织样品解冻。

• 样品用量
  

  DNA/RNA的得率和质量取决于样品量。不可超过裂解液裂解能力和吸附膜的吸附能力。根据下表使用适量的原始材料：

  
  

  样品	含量
  肌肉组织	30mg
  肝或脑组织	20mg
  肾或脾组织	10mg
  培养的细胞	1×107
  植物组织	50mg

每次使用前检查Buffer Lysis-DRP是否出现沉淀。如出现沉淀，将溶液于56℃温浴使沉淀溶解，降至室温后再使用。

CE Buffer含10mM Tris-HCl，0.5mM EDTA，pH9.0。后续实验如果要避免使用EDTA，最后一步可用水洗脱DNA。但是，pH小于7.0的水不推荐使用。

提供的CW1 Solution，CW2 Solution，GT Solution和NT Solution为浓缩液。第一次使用时，13mL CW1 Solution中应加入17mL乙醇，9mL CW2 Solution中应加入21mL乙醇，18mL GT Solution中应加入12mL乙醇，6mL NT Solution中应加入24mL乙醇，以配制成工作液。

• 本试剂盒采用了一种新技术，SD-10 DNA吸附柱可选择性结合双链DNA，SR-10 RNA吸附柱可结合总RNA。
  
• 生物样品首先在一种高度变性胍类缓冲液被裂解和匀浆(buffer lysis-DRP)，这种缓冲液可直接使DNase和RNase及蛋白酶失活。确保了提取的DNA和RNA的完整性。
  
• DNA在整个匀浆液中选择性地吸附到SD-10 DNA吸附柱。用buffer lysis-DRP洗涤吸附膜可去除SD-10 DNA吸附柱上的RNA/蛋白质污染。PCR抑制剂，蛋白质和盐离子可被CW1 Solution和CW2 Solution完全去除。纯化的DNA在CE buffer中被洗脱。
  
• 将乙醇加入到SD-10 DNA吸附柱收集管的液体中，为RNA的吸附提供了适当的条件。将样品加入到SR-10 RNA吸附柱后，总RNA即被吸附到膜上。PCR抑制剂，蛋白质和盐离子可被GT Solution和NT Solution完全去除。纯化的RNA在RNase-Free水中被洗脱。

• 样品准备
  
  • 培养的细胞
    
    • 细胞悬液：将适当数量的细胞室温300×g离心5min(最多1×10⁷)。小心吸走上清，进入步骤2。
      
    • 单层细胞：吸走培养基，加入350μL Buffer Lysis-DRP到细胞培养皿中。用细胞刮收集裂解液，将裂解液吸入离心管中。涡旋或吹打混匀，确保无可见的细胞团块，进入步骤3。
    • 如果不能立即提取样品基因组DNA，建议-80℃长期保存。
      
    • 保存的样品避免反复冻融，防止RNA降解。
  • 动物组织：取15～30mg动物组织，用液氮研磨成粉末。将冰冻的粉末转移至1.5mL RNase-free离心管中，使液氮挥发。
    
    • 若组织含细胞数量较多，比如脾，则样品用量不要超过10mg。
      
    • 加入Buffer Lysis-DRP前不要让组织样品解冻。
  • 植物：取25～50mg植物组织，用液氮研磨成粉末。将冰冻的粉末转移至1.5mL RNase-free离心管中，使液氮挥发。
  • 加入Buffer Lysis-DRP前不要让组织样品解冻。
• 立即加入350μL Buffer Lysis-DRP到上述1.5mL RNase-Free的离心管中，涡旋混匀。
  
• 12000×g，4℃离心3min，将上清转移到一个新的RNase-Free管中。

4. 将SD-10 DNA吸附柱放入2mL收集管中。将上述裂解产物加入到吸附柱后，室温静置1min，9000×g室温离心1min。将收集管中的液体转移至新的RNase-Free管中，用于RNA的纯化。
   
   • DNA洗涤和洗脱前可将收集管中的液体保存于4℃或直接提取RNA(步骤11-16)。
5. 加入350μL Buffer Lysis-DRP到SD-10 DNA吸附柱，室温静置1min，9000×g室温离心1min，倒掉收集管中的液体。
   
6. 将SD-10 DNA吸附柱放回收集管中，加入500μL CW1 Solution，室温静置1min，9000×g室温离心1min，倒掉收集管中的液体。
   
   • 检查CW1 Solution是否已加入乙醇。
7. 将SD-10 DNA吸附柱放回收集管中，加入500μL CW2 Solution，室温静置1min，9000×g室温离心1min，倒掉收集管中的液体。
   
   • 检查CW2 Solution是否已加入乙醇。
8. 将SD-10 DNA吸附柱放回收集管中，9000×g室温离心2min。
   
9. 将吸附柱打开，室温静置2～3min，使乙醇彻底挥发。将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。
   
   • 使SR-10 RNA吸附柱的吸附膜干燥是非常必要的，因为残留的乙醇可能会影响后续反应。这一步骤的离心确保了在接下来的洗脱过程中不会有残留的乙醇。
10. 向SD-10 DNA吸附柱膜中央加入50μL CE Buffer，室温静置2min后9000×g离心2min洗脱DNA。
    
    • 将CE Buffer加热至60℃可提高洗脱效率。
      
    • 使用超过50μL (比如100μL)的洗脱液可提高DNA得率，但浓度会降低。
      
    • 为获得最高的DNA得率，按步骤10再次洗脱。
      
    • 第二次洗脱时可使用新的离心管，以免第一次洗脱出的DNA浓度降低。

11. 加入250μL乙醇到步骤4收集管的液体中，充分混匀。
    
12. 将SR-10 RNA吸附柱放入收集管中，并将上述混合液转移SR-10 RNA吸附柱，9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
    
13. 加入500μL GT Solution到吸附柱中，室温静置1min，9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
    
    • 检查GT Solution是否已加入乙醇。
14. 加入500μL NT Solution到吸附柱中，室温静置1min，9000×g室温离心1min。倒掉收集管中的液体。
    
    • 检查NT Solution是否已加入乙醇。
15. 将吸附柱放回收集管中，9000×g室温离心2min。
    
    • 使SR-10 RNA吸附柱的吸附膜干燥是非常必要的，因为残留的乙醇可能会影响后续反应。这一步骤的离心确保了在接下来的洗脱过程中不会有残留的乙醇。
16. 将吸附柱放入一个新的RNase-Free离心管中，加入30～50μL RNase-Free的水，室温静置2min，9000×g离心2min。
    
    • 离心管中的溶液为RNA样品，可直接用于后续分子生物学实验或保存于-70℃。

• DNA中有RNA污染。
  
  • 最终的匀浆液中pH应为7.0，确保样品不会过酸或过碱。
    
  • 用Buffer Lysis-DRP或Buffer Lysis-DR洗涤SD-10 DNA吸附柱一次，除去RNA污染。
    
  • 直接将RNase加入到DNA洗脱液中。
• DNA得率低。
  
  • 将组织样品彻底匀浆。可用液氮或匀浆机处理组织样品。
    
  • 使用适当量的样品。DNA得率取决于样品的类型、大小、年龄和保存方法。一些DNA含量低的植物组织请提高样品量。
    
  • 请检查CW1 Solution和CW2 Solution是否已加入乙醇稀释。
    
  • 请严格参照说明书对样品进行洗脱。参考说明书提供的注意事项。
    
  • 避免SD-10吸附柱中吸附膜过于干燥。将SD-10吸附柱室温静置3～5min使吸附膜干燥。切勿长时间将吸附膜置于室温或65℃。
• RNA中有DNA污染。
  
  • 减少原始材料用量。
    
  • 对于一些DNA含量非常高的组织(比如胸腺)，部分DNA会吸附不上SD-10 DNA吸附柱。请尝试使用更少的样品。
    
  • 未完全去除细胞培养基或稳定剂。
• RNA得率低
  
  • 我们推荐使用新鲜样品。
    
  • 将组织彻底匀浆。用液氮或匀浆机处理样品。
    
  • 使用适量的样品。RNA得率取决于样品的类型、大小、年龄和保存方法。请参考说明书的推荐用量。
    
  • 检查GT Solution和NT Solution是否已加入无水乙醇。
    
  • 请严格参照说明书对样品进行洗脱。
• RNA降解
  
  • 使用新鲜样品。如果是冻存的样品，确保样品是取样后立即冷冻于液氮并合理保存于-70℃的样品。
    
  • 我们推荐用液氮处理组织样品，并立即用Buffer Lysis-DR/Buffer Lysis-DRP裂解样品。
    
  • 在RNase-Free的环境中操作。
    
  • 所有操作步骤中都佩戴手套。经常更换手套。
    
  • 推荐使用RNase-Free的离心管。
• 吸附步骤中样品成团。
  
  • 确保样品加入吸附柱前已被彻底匀浆。
    
  • 样品加入吸附柱前12000×g离心3min除去纤维和细胞碎片。
    
  • 减少样品使用量。根据说明书使用适量大小的样品。
    
  • 检查Buffer Lysis-DRP或Buffer Lysis-DR，如果保存过程中出现沉淀，加热至56℃使沉淀溶解。
• 抑制后续实验。
  
  • 来源于CW2 Solution的残留乙醇会抑制后续实验的酶促反应。吸附柱12000×g离心2min，开盖后室温静置3～5min，使SD-10吸附柱吸附膜上残留的乙醇彻底挥发。
    
  • 残留盐离子会抑制后续实验的酶促反应。确保洗涤步骤在室温下操作。